Поддержание и сохранение клеточных культур
Поддержание и сохранение культуры картофеля
Материалы и оборудование: пробирки с растениями картофеля, стерильный пинцет, скальпель, кисточка, стаканчик с этанолом, чашка Петри, кафельная плитка, спиртовка, спички, пробирки с питательной средой МС
.
Для замедления роста растений из черенков ТУР (ретардант, применяемый в
сельском хозяйстве против полегания стеблей растений - хлорхолинхлорид, ССС) в концентрации 0.4-0.5 мл/л добавляют в среду МС, при этом промежуток между двумя последующими черенкованиями увеличивается с 1 до 4 месяцев, а высота со сближенными междоузлиями не превышает 3-4 см. Растения приобретают темно-зеленую окраску.
Одним из способов сохранения и поддержания коллекции in vitro является
клубнеобразование в пробирках. На процесс образования клубней in vitro оказывает влияние фотопериод, температура, ростовые вещества, содержание сахарозы в питательной среде.
Ход работы:
Черенки переносят на модицифированную питательную среду МС для образования
клубней картофеля, ее компоненты: Макроэлементы по прописи МС Микроэлементы по
прописи МС Источники железа Витамины по прописи МС + аденин -
0.25 мг/л Источник углерода: сахароза - 70 г/л Агар-агар - 7 г/л Гормоны: ИУК
- 1 мг/л рН готовой среды 5.6-5.8. Культивирование черенков проводится под люминесцентными лампами при 10 часовом фотопериоде, освещенности 3.5-4 тыс.люкс, влажности 70%. После трехнедельного выдерживания на 10-часовом фотопериоде растения переносят на 2 суток в темноту, а затем на 16 часовой период и оставляют в этих условиях до завершения клубнеобразования.
После отмирания растений и достижения микроклубнями размера 0.7-1.4 см их извлекают из пробирок (в стерильных условиях) и хранят в пробирках, закрытых ватными пробками, в холодильнике, при температуре +2 - +4оС.
|
|