биотехнология для чайников фитокамера для растительных культур, фотография любезно предоставлена Н.В. Пликиной
биотехнология составы и приготовление питательных сред культивирование клеток тесты по биотехнологии

Методики культивирования клеток

Начнем с того, что растительные и животные клетки предьявляют совершенно различные требования к условиям культивирования.
Для животных клеток диапазон оптимального существования очень узок. Это касается и температурных условий, и состава питательных сред (необходимо строго выдерживать pH, молярность и т.д.), и газового состава. Пожалуй, наименее требовательны они к освещению. Для выращивания животных клеток всегда используют готовые фабричные питательные среды, а для длительного поддержания линии нужен термостат. Для некоторых видов клеток газовый состав воздуха можно обеспечить, поместив флаконы с культурой в эксикатор (емкость с притирающейся крышкой) в который также помещают горящую свечку. Когда эксикатор плотно закрыт, свеча затухает сама при концентрации углекислого газа в воздухе 5%.
Подробнее о условиях культивирования животных клеток и культивировании органов можно прочесть в учебнике по биотехнологии.

фитокамера для культивирования клетокЗаводить и вести культуру растительных клеток гораздо проще.
Растительные культуры поддерживают при температурах от 22 до 27оС, в темноте или при освещении. Среды для них - несложные, и их легко приготовить самому. Культивировать можно на твердых питательных средах с добавлением агар-агара, крахмала (методика изложена в главе "питательные среды" или на жидких питательных средах, с использованием мостиков из ваты и фильтровальной бумаги:
Когда мы проводили работы по селекции каллусов на среде с ПЭГ (очень сильный осмотик, имитирующий засуху в этих экспериментах), то столкнулись с проблемой - агар в присутствии высоких концентраций полиэтиленгликоля не застывал после автоклавирования. Выход был найден - на дно пробирок или баночек клали комочек ваты (рыхлый), сверху - вырезанный по диаметру сосуда кусочек фильтровальной бумаги, заливали жидкой питательной средой так, чтобы ее уровень не превышал 1 мм над поверхностью бумаги. Высота столбика среды в пробирке диаметром 2 см - примерно 1-1,5 см, в баночке из под детского питания - 0,5 см.

Суспензионные культуры растительных клеток поддерживать гораздо сложнее - необходима мешалка для постоянного перемешивания среды. Иначе эксплант погибнет, в первую очередь, от отсутствия доступа кислорода.
Условия освещения различны в зависимости от поставленных вами задач. Каллусную ткань обычно получают в темноте. Клональное микроразмножение проводят при освещении. В качестве источника света лучше пригодны лампы дневного света. Они не нагревают камеру и имеют более или менее подходящий для растений спектральный состав света.

    
световая камера для культивирования клеток


отправить письмо
©  2009 Наталья Кузьмина